10.9.1　CRISPR-Cas9 Cas9 核酸酶被 gRNA 引導到目標 DNA 序列，在 PAM 上游 3 bp 處切出雙股斷裂。 機制： gRNA（single guide RNA, sgRNA） 與 Cas9 組裝 gRNA 與目標 DNA 配對（約 20 nt）+ Cas9 識別 PAM 序列（5'-NGG-3'） Cas9 切出雙股斷裂（DSB） 細胞修復： NHEJ（非同源末端接合）→ 常產生 indel → 基因敲除（knockout） HDR（同源重組修復；需提供 donor template）→ 精確基因編輯（knockin） 應用：遺傳疾病治療（鐮刀型貧血、地中海貧血，Casgevy 為首個 FDA 核准 CRISPR 療法）、癌症研究、農業改造。 原型系統來自細菌/古菌的 CRISPR-Cas 適應性免疫系統（對抗噬菌體）。 10.9.2　RNA 干擾（RNAi）與 siRNA siRNA（small interfering RNA）：21–23 個核苷酸的雙股 RNA 由 Dicer 將長雙股 RNA 切成 siRNA RISC（RNA-induced silencing complex） 拆開 siRNA → 保留 guide 股 → 引導切開互補 mRNA 用途：基因 knockdown（實驗室最常用工具之一）；治療（patisiran 治 hATTR 澱粉樣變） 國考：「siRNA 通常幾核苷酸？」= 21–23 nt。 10.9.3　Antisense oligonucleotides（ASO） 第八章已提。與 siRNA 不同：ASO 是單股 DNA 類似物；siRNA 是雙股 RNA。