10.7.1 DNA / RNA 瓊脂糖電泳
DNA 片段於瓊脂糖凝膠中依大小分離,小片段跑得快;以溴化乙錠(EtBr)或 SYBR 染色於 UV 下顯影。
DNA / RNA 帶負電 → 在電場中往正極(陽極)移動
凝膠濃度:瓊脂糖 0.5–2% 用於 DNA 片段(0.1–20 kb);聚丙烯醯胺(PAGE) 用於短片段定序或蛋白質
染色:EtBr(有致突變性)、SYBR Green/Safe(較安全)
10.7.2 SDS-PAGE(蛋白質電泳)
SDS-PAGE:蛋白質被 SDS 變性 + 均勻帶負電 → 依分子量分離。
SDS(dodecyl sulfate):強陰離子界面活性劑,打開蛋白質三級結構並以均一負電比(約 1.4 g SDS / g 蛋白)包覆
β-mercaptoethanol / DTT:還原雙硫鍵(打開四級結構)
加熱變性 → 所有蛋白質成為無結構、均電荷的多胜肽 → 電場下只依分子量分離(小的跑快)
10.7.3 三大 Blot 家族
記憶技巧:「南方(Southern)= DNA、北方(Northern)= RNA、西方(Western)= Protein」,再加少考的 Southwestern(偵測 DNA-binding protein)。
Blot 偵測標的 探針
Southern blot DNA(基因體) 互補 DNA / RNA probe + 放射標記或化學發光
Northern blot RNA(mRNA 或其他 RNA) 同上
Western blot 蛋白質 一級抗體 + 二級抗體(結 HRP)
Southern blot 流程(RFLP / DNA 指紋鑑定典型):
DNA → 限制酶切
瓊脂糖電泳分離
轉印(blot)到尼龍膜
變性、固定
放射 / 化學發光標記探針雜交
顯影
國考:
• 「RFLP + DNA 指紋鑑定 → 需結合何種技術?」= Southern blotting(DNA → 切 → 跑膠 → 轉膜 → 雜交)。
• 「RFLP 不適用於什麼?」= 建立 cDNA library(cDNA library 要把 mRNA 反轉錄成 cDNA 再選殖,與 RFLP 無關)。
10.7.4 ELISA(酵素連結免疫吸附分析)
夾心式 ELISA:捕捉抗體 → 受質蛋白 → 偵測抗體 → 酵素受質顯色 → A₄₅₀ 測讀。
常見四型:
Direct:固定抗原 + 酵素標記抗體
Indirect:固定抗原 + 一抗 + 酵素二抗
Sandwich:兩個不同抗原位的一抗夾住受質 → 最特異且敏感(臨床診斷常用)
Competitive:標準品與樣品競爭抗體結合位
臨床應用:HIV 抗體、B/C 肝炎、HCG(驗孕)、心肌指標、細胞激素、自體抗體等。
本節對應國考題 共 1 題 · 隨選 1 題
現場作答這 1 題
- 112-1-醫學一 Q100 以限制性片段長度多態性(restriction fragment length …